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Fisher細(xì)胞爬片的組織取材與制作方法

發(fā)布時間: 2018-08-06  點擊次數(shù): 1161次
Fisher細(xì)胞爬片組織取材
1、腦組織和神經(jīng)組織應(yīng)采用灌注固定后,再進(jìn)行后固定。
2、組織取材注意事項:
(1)標(biāo)本新鮮:組織要求離體后30min~2h內(nèi)浸入固定液,尤其是開展分子生物學(xué)工作。動物組織取材要求心臟還在跳動時取材。
(2)注意防止人為因素的影響刀和剪要快,避免擠壓。
(3)組織塊的大小 厚為0.1~0.3cm,大小可根據(jù)需要而定。

Fisher細(xì)胞爬片的制作方法
1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片。
2.應(yīng)用蓋玻片,可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪時可用前護(hù)士輸液用于打開玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開了。如果接種大皿的話,一般不將蓋玻片切開,直接清潔后放入培養(yǎng)皿中,到染色時再將之切開,這樣既保證了細(xì)胞均一性,又可同時做幾個指標(biāo)的染色。
3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過夜,第二天先用自來水沖洗20遍,再置于無水酒清中浸泡6小時,再用三蒸水沖洗3遍,放在飯盒或者玻璃培養(yǎng)皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,備用。烤干后可放入超凈臺中。
5.關(guān)于多聚賴氨酸,很多人都將玻片用此處理,以使細(xì)胞與玻片結(jié)合更牢。但我在做爬片時從來沒用過多聚賴氨酸,細(xì)胞貼壁仍然很好,且在做后續(xù)的免疫細(xì)胞化學(xué)染色、tunel等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過片。
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